產品概述:
Thermo Scientific EZ-Link Phosphine-PEG4-Desthiobiotin 是一種聚乙二醇化試劑,其生物素樣基團可從鏈霉親和素中洗脫,激活后可用于化學選擇性連接和純化代謝標記的疊氮化物靶標。
EZ-Link Phosphine-PEG4-Desthiobiotin 的特點:
? Desthiobiotin — 生物素的類似物可以輕松從鏈霉親和素中洗脫,這是親和純化應用的理想特性
?化學選擇性— 膦反應基團在生物樣品中對疊氮化物標記分子具有特異性,確保特異性標記目標的捕獲和純化
?兼容—施陶丁格反應化學在簡單的緩沖條件下有效進行;不需要輔助試劑,例如銅或還原劑
? PEG 間隔臂 - 聚乙二醇間隔臂有助于保持標記分子的溶解性并降低與親和素、鏈霉親和素或 NeutrAvidin 親和結合的空間位阻
?可溶性- 易溶于水混溶性溶劑(例如,DMSO)用于隨后在含有細胞裂解物和其他生物樣品的水性反應混合物中稀釋
當與疊氮化物標記策略結合使用時,膦-PEG4-脫硫生物素能夠使用鏈霉親和素樹脂對蛋白質相互作用和翻譯后修飾進行親和純化。膦部分通過Staudinger 反應機制對已用生物正交疊氮基團標記或代謝標記的分子。脫硫生物素標簽以高特異性與鏈霉親和素和其他生物素結合蛋白結合,但在溫和條件下很容易洗脫(即,通過與常規、游離生物素的競爭性置換)。因此,對于需要標記蛋白質的非變性洗脫的親和素-生物素技術,該試劑是膦-PEG3-生物素(部件號 88901)的有用替代品。無稱量形式(5 x 1 mg 可重新密封的小瓶)消除了稱量少量試劑相關的困難,并最大限度地保護未使用的試劑免于降解。
脫硫生物素與生物素
脫硫生物素是一種單環、無硫的生物素類似物,與鏈霉親和素結合的特異性幾乎相同,但親和力低于生物素(1/Kd = 10 11vs. 10 15米,分別)。因此,脫硫生物素化的誘餌蛋白及其相互作用的伙伴可以使用基于與游離生物素的競爭性置換的溫和條件從鏈霉親和素親和樹脂中容易且特異性地洗脫。對于生物樣品的下拉測定實驗,脫硫生物素的這種軟釋放特性還有助于最大限度地減少內源性生物素化分子的共純化,這些分子在目標蛋白復合物與游離生物素洗脫后仍與鏈霉親和素結合。改良的親和素-生物素親和系統還消除了使用可能使復合物解離和/或損壞靶蛋白或細胞的苛刻洗脫條件的需要。
用磷化氫試劑標記疊氮化物基團可以通過 用天然存在的代謝構件的疊氮化物衍生物進行體內
標記而被引入蛋白質或其他細胞靶標 中。因為膦和疊氮化物是外來的并且對生物系統不可見(生物正交),它們包含用于標記和綴合的化學選擇性(相互特異性)連接對。