mMESSAGE mMACHINE? SP6 轉錄試劑盒

mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒設計用于體外合成大量的加帽 RNA。加帽 RNA 能模擬體內發現的大多數真核 mRNA，因為其在 5' 端有一個 7-甲基鳥苷帽結構。mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒反應包括超高得率轉錄反應中的帽類似物 [m7G(5')ppp(5')G]。帽類似物僅作為轉錄本的第一個或 5' 終端 G 摻入，因為其結構使得無法在 RNA 分子中的其他位置將其摻入。

mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒如何工作
mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒有簡化的反應形式，其中所有 4 個核糖核苷酸和帽類似物混合于單一溶液中。該溶液的帽類似物:GTP 比值為 4:1，這是盡可能提高 RNA 得率和加帽轉錄本比例的理想選擇。mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒是對加帽 RNA 進行卵母細胞顯微注射、體外翻譯、轉染和其他應用的常規合成的理想選擇。在存在高核苷酸濃度的情況下，通過優化 RNA 合成的反應條件來實現高得率。此外，合成的 RNA 不會被任何可能含有 RNase 抑制劑—（酶混合物的組分）的污染核糖核酸酶降解。

使用 mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒
在 2 小時孵育期間的 20 μL 反應中，mMESSAGE mMACHINE? 高得率加帽 RNA 轉錄將產生大量的加帽 RNA。該方法獲得的得率為使用常規體外轉錄反應的 10–50 倍。帽類似物與 GTP 的比值已經過優化，能夠在得率 (15–35 μg) 和加帽轉錄本的比例 (80%) 之間實現良好折衷。mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒還包含一個 LiCl 沉淀溶液，該溶液可有效分離來自加帽 RNA 的蛋白質和未摻入的核苷酸（包括自由帽類似物），提高翻譯效率。mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒僅針對與試劑盒中包含的聚合酶配合使用進行了優化。使用不同的聚合酶可能會導致得率低。mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒包含 25 次轉錄反應所需的所有緩沖液和試劑。使用試劑盒提供的對照模板（非洲蟾蜍延伸因子 1α，pTRI Xef），每次 mMESSAGE mMACHINE? 反應將使用 T3 或 T7 RNA 聚合酶產生約 20–30 μg 的 RNA，或使用 SP6 RNA 聚合酶產生約 15–25 μg RNA。