產品概述：
Thermo Scientific Pierce 細胞表面蛋白生物素化和分離試劑盒能實現質膜蛋白的選擇性生物素化、增溶和富集。
細胞表面蛋白生物素化和分離試劑盒的特點包括：
?提高性能—試劑盒和方案經過重新設計，可提高生物素化質膜蛋白的富集和提取效率，同時較大程度減少細胞內蛋白污染
?優化—方案已被刷新，從而縮短了處理時間和步驟數，試劑配方經過優化，可提高性能
?兼容性—已使用懸浮和貼壁細胞系對試劑進行驗證，并提供了 MS 樣品制備的其他說明
?經驗證應用—試劑和程序與 Western 印跡和 MS 應用兼容
該易于使用的試劑盒提供了實現細胞表面蛋白的理想標記和后續分離的所有必要組分和程序。緩沖液預先配制，可生成一致的結果。哺乳動物細胞首先用 EZ-Link Sulfo-NHS-SS-生物素（是一種硫醇可裂解的胺反應性生物素化試劑）標記。細胞隨后被裂解并用 NeutrAvidin 瓊脂糖捕獲標記的蛋白。二硫蘇糖醇 (DTT) 用于洗脫以還原生物素標記中的二硫鍵，從而釋放不帶生物素標記的結合蛋白。本試劑盒包含足夠進行 8 次實驗的試劑，由 2 個 85-95% 匯合的 15 cm 培養皿或 4 個 75 cm2燒瓶組成。
細胞表面蛋白代表細胞蛋白的重要子集并在信號轉導、細胞粘附、離子轉運中起著重要作用。這些蛋白具有多個跨膜結構域，因此難以高效提取和分離。高效提取所需的嚴苛去污劑和條件通常會在分離后導致質膜蛋白的變性和污染。作為備選方案，該試劑盒利用膜不可透過性、胺反應性 sulfo-NHS-SS-生物素高效標記具有可獲取賴氨酸的細胞表面蛋白。裂解、捕獲、洗滌和洗脫條件已經過優化，可實現高效富集和分離，同時盡可能減少細胞內蛋白的污染。
此方案已針對多種哺乳動物細胞系（包括貼壁和懸浮細胞）進行了優化，適用于處理細胞和未處理細胞之間或一個或多個細胞系之間的差異表達分析。細胞表面蛋白分離的選擇性和有效性已通過 Western 印跡和 LC-MS 分析驗證。